免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質(zhì)印跡（Western blotting），是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。結(jié)合化學(xué)發(fā)光檢測，可以同時(shí)比較多個(gè)樣品同種蛋白的表達(dá)量差異。

　　由于抗體僅與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合，因此一般只能看到一條清晰的帶，條帶的粗細(xì)對(duì)應(yīng)于蛋白質(zhì)量。通過分析特定反應(yīng)的位置和強(qiáng)度，可以獲得目標(biāo)蛋白在給定細(xì)胞或組織勻漿中的表達(dá)信息。由于凝膠電泳的高分辨率和免疫的強(qiáng)特異性和高靈敏度，Western印跡分析可檢測低至1ng的靶蛋白。該方法廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、生物化學(xué)、免疫遺傳學(xué)等分子生物學(xué)領(lǐng)域。

　　全自動(dòng)WB工作站操作步驟：

　　1.準(zhǔn)備樣品

　　1）制冰，準(zhǔn)備冰盒。

　　2）配制細(xì)胞裂解液：根據(jù)細(xì)胞數(shù)量確定所需裂解液：50ul/六孔板一孔。

　　裂解液配方：100ul碧云天裂解液+1ul蛋白酶抑制劑混合物+1ul PMSF

　　3）按實(shí)驗(yàn)需要準(zhǔn)備好細(xì)胞：去掉培養(yǎng)基，1×PBS洗3次（去掉培養(yǎng)基中的血清），每個(gè)孔（6孔板）加入適量的裂解液。迅速用細(xì)胞刮刮下細(xì)胞并轉(zhuǎn)移至1.5ml管中，置于冰上20min，振蕩混合后，再置冰上10min。

　　4）12，000g，4℃離心15min，收集上清至另一1.5ml管。

　　5）取2.5ul樣品加22.5ul三蒸水稀釋，用于BCA法測蛋白濃度。

　　6）其余樣品加5×Loading Buffer（按2.5mlBuffer/10ml蛋白）用95℃煮10分鐘，期間振蕩一次。

　　7）直接上樣跑膠或者分裝-80°C長期保存。